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以Thermo T7 RNA Polymerase为基础的高效率转录试剂盒。

高效率RNA合成试剂盒 ScriptMAX® Thermo T7 transcription Kit

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价格表

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TSK-101 60次份 RMB1,300 -20℃ 产品说明书

用途

●以环状及线性DNA为模板的体外翻译（in vitro translation）反应体系用mRNA的合成
●tRNA、rRNA、ribozyme及anti-sense RNA等的大量合成
●RNAi用双链RNA的合成
●RNA splicing反应的前体的合成
●Hybridization Assay用的高标记RNA探针的合成
●合成以Cap类似物为引物的具Cap构造的mRNA 


说明

本品是以热稳定性提高的RNA合成酶「Thermo T7 RNA Polymerase 〈〈TT7 〉〉」为基础，RNA合成量大幅度提高的高效率RNA合成试剂盒。
本品中因添加了Accelerator Solution，能得到用原来方法2～4倍浓度的RNA。另外，本品使用了Thermo T7 RNA Polymerase，其热稳定性很高，可在较广的温度范围内进行反应，且37℃时的比活也有了大幅度提高。


 

特征

●高效率

因添加了Accelerator Solution，与原来的方法相比，能得到2～4倍的RNA量。


●卓越的耐热性

使用了Thermo T7 RNA Polymerase 〈〈TT7 〉〉，与使用野生型T7 RNA Polymerase的试剂盒相比，可在较广温度范围内进行反应。 


●最适于无细胞蛋白质合成用mRNA的合成


 

实验例


1.与原来方法的RNA合成量的比较
以带有T7 promotor的线性DNA为模板，分别用ScriptMAX® 及A公司的T7 RNA聚合酶进行RNA的合成反应。20μl的反应体系中加500ng的模板，37℃反应2小时。反应后，将合成的RNA在变性条件下用1%TAE琼脂糖凝胶进行电泳检测。结果显示，与原来方法相比，合成效率得到了大幅度提高。


2.各体外转录（in vitro Transcription）试剂盒合成温度与RNA合成量的比较
以带有T7 promotor的线性DNA为模板，分别用ScriptMAX® 及B公司、C公司的体外转录（in vitro Transcription）试剂盒，在37℃～50℃进行RNA的合成反应。20μl的反应体系中加500ng的模板，反应2小时，将合成的RNA在变性条件下用胶过滤纯化，测定RNA的浓度。结果显示，ScriptMAX® 在45℃以上的高温区域也能获得稳定的RNA。





 

参考文献

1)K. Ishikawa et al., Nucl.Acids Res., 33: e112(2005)
2)M. Itoh et al., Nucl. Acids Res.,30: 5452-5464(2002)
3)M. Chamberlin and J. Ring,J. Biol. Chem., 248: 2235(1973)
4)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2245(1973)

产品内容

Thermo T7 RNA Polymerase  60μl

10×Basal Reaction Buffer  400μl

5×Accelerator Solution  400μl

25mM rNTPs Mixture  280μl

RNase Inhibitor(40U/μl)  30μl

Nuclease-free Water(not  DEPC treated)  1ml

基本反应条件

〈Protocol A〉

●线性DNA开始的mRNA合成

●tRNA、rRNA、ribozyme及anti-sense RNA等的大量合成

●RNAi用双链RNA的合成


10x Basal Reaction Buffer 2μl

5× Accelerator Solution 4μl

25mM rNTPs Mixture 4.5μl

RNase inhibitor  0.5μl

Template DNA  0.1-1.0μg

Thermo T7 RNA polymerase 1μl

Total Volume  20μl

　　↓

37-42℃, 2hr.



〈Protocol B〉

●环状DNA开始的mRNA合成

●RNA探针等特异性较高的RNA的少量合成


10× Basal Reaction Buffer 2μl

25mM rNTPs Mixture 2μl

RNase Inhibitor  0.5μl

Template DNA  1-2μg

Thermo T7 RNA Polymerase 1μl

Total Volume  20μl

　　↓

37-42℃, 2-4hr.

备注

本试剂盒中附带的10×Basal Reaction Buffer与Thermo T7 RNA Polymerase [Code No.TRL-201]中附带的buffer组分是不同的。

几点建议

●模板DNA

作为模板的质粒DNA，要使用纯度高的DNA。特别是在质粒抽提中使用RNase的情况时，使用苯酚・氯仿等处理去除RNase，会得到较好的效果。 另外，虽然线性、环状模板都可以用本试剂盒合成RNA，但是转录产物的特征有时各不相同，需要根据RNA的使用目的进行选择。


●反应温度

本品中的Thermo T7 RNA Polymerase与野生型的T7 RNA polymerase相比，在高温区域的活性半衰期变长了。在用比本试剂盒推荐的反应时间(2小时)短的时间进行反应时，采用较高的温度，有时会合成更多的RNA。另外，通过高温反应，模板DNA的立体结构障碍的影响会减少，能够提高RNA的得率。

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