用途
RT-PCR用cDNA的合成
说明
本试剂盒使用的逆转录酶ReverTra Ace®属于在高温反应性和反应效率方面进行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH-)，与以往的RTase相比，可以合成更长的cDNA(已确认到可以合成cDNA长度最长可达14kb)。
特征
●高效率
使用高效率逆转录酶「ReverTra Ace®」，可以高效率地合成cDNA。
●应用范围广
可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各种逆转录情况。
●确证
因含有阳性对照（positive control）, 可在确证各步骤的同时推进实验进展。
实验例
使用ReverTra Ace -α-®以HeLa Total RNA(1μg)为模板，进行cDNA的合成后，使用各种PCR酶，以β-actin(838bp)为目的片段进行PCR反应。cDNA合成反应是在20μl的反应体系中，42℃下反应20min.，接着99℃进行5min的失活处理。然后，向合成的cDNA反应液中加入80μl的PCR溶液，使总体系达100μl，进行PCR反应。
结果显示，所有的酶都确认有扩增，ReverTra Ace -α-®的逆转录产物可适用于各种PCR酶的扩增反应。
参考文献
1)Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)
- 产品内容
ReverTra Ace®100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
Random Primer〔FSK-301〕100μl
Oligo(dT)20 Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
RNase Inhibitor100μl
RNase Free H2O1.2ml
*5×RT Buffer与ReverTra® Ace用的Buffer组分相同。
- 基本反应条件
〈cDNA合成〉
灭菌蒸馏水Xμl
模板RNA
100-1000ng total RNA
10-100ng mRNA
Primer
1μl Oligo(dT)20 Primer
1μl Random Primer
10pmoles* Specific Primer
5×RT Buffer4μl
10mM dNTPs2μl
ReverTra Ace®1μl
RNase Inhibitor1μl
Total Volume20μl
- 几点建议
● PCR反应液的添加量
以Taq为基础的PCR酶以及KOD Dash的反应中最多可添加20%，KOD -Plus- 系列及KOD FX 系列的反应中最多可添加4%，推荐最好使用2%以下的逆转录反应液。
●模板RNA
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。各种情况下使用高纯度的样品时，可以得到较好的结果。
●对照体系
样品在第一次进行RT-PCR时，推荐同时进行对照实验。本试剂盒的对照用G3PDH引物，可适用于human、mouse、rat及swine的对照使用，PCR产物长度0.45kb。
FAQ请点击这里。
相关产品
●（单独销售的包装）
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace用 Buffer (5× RT Buffer) | TRT-1B | 1ml×1支 | RMB 50 | -20℃ | - |
| dNTPs Mixture(10mM) | NTP-301 | 各2umoles/0.2ml × 1支 | RMB 200 | -20℃ | - |
| oligo(dT)20 | FSK-201 | 1nmole × 1支 | RMB 200 | -20℃ | - |
| Random Primer(9mer) | FSK-301 | 2.5nmoles × 1支 | RMB 200 | -20℃ | - |
●高效率逆转录酶
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace | TRT-101 | 10000U × 1支 | RMB 800 | -20℃ | - |
●高效率RT-PCR试剂盒
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Dash® | PCR-401 | 100次份 | RMB 2,200 | -20℃ |
|
●高保真性RT-PCR试剂盒
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra-Plus-™ | PCR-501 | 100次份 | RMB 2,390 | -20℃ |
|
●Realtime PCR用cDNA合成试剂盒(预混型逆转录试剂+基因组DNA去除试剂)
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover | FSQ-301 | 200次份 × 1(10μl反应体系) | RMB 2,800 | -20℃ |
|
●Realtime PCR用cDNA合成试剂盒(预混型逆转录试剂)
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix | FSQ-201 | 200次份 × 1(10μl反应体系) | RMB 2,000 | -20℃ |
|
●Realtime PCR用cDNA合成试剂盒
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace® qPCR RT Kit | FSQ-101 | 200次份 × 1(10μl反应体系) | RMB 1,500 | -20℃ |
|
●RNase Inhibitor
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| RNase Inhibitor Recombinant type | SIN-201 | 2500U × 1支 | RMB 300 | -20℃ | - |
